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聚丙烯酰胺凝胶电泳凝胶的配置过程

作者:admin 来源:未知 日期:2018/2/1 10:13:18 人气: 标签:
导读:聚丙烯酰胺凝胶电泳凝胶的配置过程(1)制胶在两块制胶玻璃板中间放上垫片,放上制胶架,拧紧制胶螺丝夹紧玻璃板。制备适量合适浓度的凝胶,使之略多于胶板,不同浓度(%)聚丙酰胺凝胶的制法:在加入TEMED和10%过硫…

聚丙烯酰胺凝胶电泳凝胶的配置过程

    
    (1)制胶 在两块制胶玻璃板中间放上垫片,放上制胶架,拧紧制胶螺丝夹紧玻璃板。 制备适量合适浓度的凝胶,使之略多于胶板, 不同浓度(%)聚丙酰胺凝胶的制法: 在加入 TEMED 和 10%过硫酸铵后,立即混匀,倒入放置 45℃角的玻璃板内,完全注满(注 意不要有气泡) ,迅速将玻璃板放置水平位置。立即放成型梳子于腔顶并夹紧,待 30-60 分 钟胶聚合后,取下胶板,放入电泳槽中固定。 
 
    (2)加样和电泳 上下槽中加入 1×TBE 电泳缓冲液,溢过加样孔,拔出梳子,排出加样孔中的气泡,将 PCR 产物或限制性内切酶消化产物 2 与 1 上样缓冲液混匀, 用微量注射器加入加样孔底部, 使样 品在孔底成一层,两侧孔中加入标准分子量的 DNA Marker。 以 2-10V/cm 电压电泳,电泳时间足够长,使片断足以分开,待指示剂走到适宜位置时关闭 电源,将胶片取出。
 
     (3)银染 分开两块玻璃板, 将凝胶片放入 100ml 银染固定液中振荡 15min, 双蒸水洗 3 次, 每次 2min, 然后将凝胶片转入 100ml 0.2%的 AgNO3 中于摇床上染色约 10min,吸去 AgNO3 液,用双蒸 水洗 3 次,每次 30s,加入 100ml 显色液约 7-10min,待 DNA 带显示清除时,吸去显色液, 加入固定液 Na2CO3,静置 2-3min,取出凝胶观察。 
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